ความแตกต่างระหว่างการแปลนิพจน์และการขยายตัวของไพรเมอร์ | การแปลนิพจน์และนามสกุลไพรเมอร์

ความแตกต่างสำคัญ - การแปลนิคและการขยายตัวของไพรเมอร์

ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการแปลชื่อและการขยายตัวของไพรเมอร์คือขั้นตอนการแปลชื่อ nick ทำให้มีการตรวจสอบฉลากสำหรับเทคนิค hybridization อื่น ๆ ขณะที่วิธีการ primer extension จะระบุลำดับ RNA เฉพาะจากส่วนผสมและแสดงข้อมูลเกี่ยวกับการแสดงออกของ mRNA. เทคนิคทั้งสองมีความสำคัญมากและได้รับการปฏิบัติเป็นประจำในห้องปฏิบัติการวิจัยระดับโมเลกุล

เนื้อหา

1 ภาพรวมและข้อแตกต่างที่สำคัญ

2. นิคแปลคืออะไร

3. อายุการใช้งานของ Primer Extension คืออะไร

4. การเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน - การแปลนิคและนามสกุลไพรเมอร์

5. สรุป

การแปลนิกคืออะไร?

การแปล Nick เป็นเทคนิคที่สำคัญที่ใช้ในการเตรียม probes ที่มีข้อความกำกับไว้สำหรับเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุลต่างๆเช่น blotting, hybridization in situ, fluorescent 999 in situ resistence เป็นต้นเป็น in vitro วิธีการติดฉลากดีเอ็นเอ เครื่องตรวจสอบดีเอ็นเอจะใช้เพื่อระบุลำดับ DNA หรือ RNA ที่เฉพาะเจาะจง ด้วยความช่วยเหลือของการตรวจสอบที่มีข้อความกำกับระบุชิ้นส่วนที่เฉพาะเจาะจงสามารถทำเครื่องหมายหรือแสดงภาพจากส่วนผสมที่ซับซ้อนของกรดนิวคลีอิก ดังนั้นจึงมีการเตรียมตัวอยางที่ติดฉลากโดยใชเทคนิคตาง ๆ เพื่อใชกับเทคนิคตาง ๆ นิกแปลเป็นหนึ่งในวิธีการดังกล่าวซึ่งทำให้เกิดการตรวจสอบที่มีข้อความกำกับด้วยความช่วยเหลือของเอนไซม์ DNase 1 และ DNA polymerase 1

ขั้นตอนการแปลชื่อเริ่มต้นด้วยเอนไซม์ DNase 1 DNase 1 แนะนำ nicks ในกระดูกสันหลังฟอสฟอรัสของดีเอ็นเอแบบคู่โดยการตัดพันธะ phosphodiester ระหว่าง nucleotides เมื่อสร้างนิวคลีโอไทด์ฟรี 3 'กลุ่ม OH จะทำให้เกิดเอนไซม์ DNA polymerase 1 ขึ้น กิจกรรม 'exonuclease' 5 'ถึง 3' ของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ 1 จะขจัดนิวคลีโอไทด์ออกจากนิกเกิลตามทิศทาง 3 'ของเส้นใยดีเอ็นเอ กิจกรรมของเอนไซม์ดีเอ็นเอโพลีเมอร์ 1 ทำงานได้ดีขึ้นและเพิ่มนิวคลีโอไทด์เพื่อทดแทนนิวคลีโอไทด์ที่ถูกลบออก ถ้านิวคลีโอไทด์ถูกระบุว่ามีการแทนที่จะเกิดขึ้นจากนิวคลีโอไทด์ที่มีข้อความกำกับและจะทำเครื่องหมาย DNA เพื่อระบุ ดีเอ็นเอที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่นี้สามารถนำมาใช้เป็นโพรบในปฏิกิริยาลูกผสมต่างๆในชีววิทยาโมเลกุล รูปที่ 01: ขั้นตอนการแปล Nick Primer Extension คืออะไร?

การขยายตัวของไพรเมอร์เป็นเทคนิคที่ใช้ในการหาลำดับอาร์เอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงจากส่วนผสม RNA และหาตำแหน่งที่ 5 ของ mRNA transcript นอกจากนี้ยังใช้เพื่อศึกษาโครงสร้างของ RNA และการแสดงออก วิธีการต่อรองพื้นจะดำเนินการด้วยไพรเมอร์ที่ติดฉลากหรือมีป้ายชื่อนิวคลีโอไทด์ ถ้าใช้ไพรเมอร์ที่มีข้อความระบุว่าไม่มีความจำเป็นในการติดฉลากนิวคลีโอไทด์ที่ใช้ในการสังเคราะห์ cDNA มีหลายขั้นตอนในเทคนิคนี้ มันเริ่มต้นด้วยการสกัดของ RNA จากตัวอย่าง จากนั้นจึงใส่ไพรเมอร์ oligonucleotide ที่ติดฉลากลงในส่วนผสมพร้อมกับส่วนผสมที่จำเป็นในการสังเคราะห์ cDNA ของลำดับอาร์เอ็นเอเฉพาะ รองพื้นรองพื้นด้วยลำดับเสริมจากส่วนผสม การใช้ลำดับไพรเมอร์ที่ผ่านการอบอ่อนเป็นแม่แบบเอนไซม์ reverse transcriptase สังเคราะห์ดีเอ็นเอเสริม (cDNA) ของลำดับอาร์เอ็นเอ การหลอมเหลวรองพื้นและการถอดแบบย้อนกลับเกิดขึ้นเฉพาะเมื่อมีการระบุลำดับ RNA เฉพาะในตัวอย่างเท่านั้น สุดท้ายเมื่อทำการเจลอิเลคโตรโฟเรซิสเจลทำให้สามารถกำหนดขนาดของลำดับอาร์เอ็นเอได้ นอกจากนี้ยังสามารถหาฐาน +1 ของ mRNA (จุดเริ่มต้นการถอดความต้นกำเนิด) โดยใช้วิธีการขยายไพรเมอร์ ปริมาณของ mRNA ที่มีอยู่ในตัวอย่างสามารถวัดได้ด้วยวิธีนี้ถ้าใช้ไพรเมอร์ส่วนเกิน

รูปที่ 02: ส่วนขยายของไพรเมอร์

อะไรคือความแตกต่างระหว่างการแปลนิพจน์และการขยายตัวของไพรเมอร์?

- diff บทความกลางก่อนตาราง ->

การแปลนิกและนามสกุลไพรเมอร์

การแปล Nick เป็นกระบวนการที่สร้างตัวตรวจดีเอ็นเอที่ติดฉลากไว้สำหรับปฏิกิริยาลูกผสมต่างๆ

การขยายตัวของไพรเมอร์เป็นเทคนิคที่ใช้ในการหา RNA เฉพาะหรือเพื่อศึกษาการแสดงออกของยีน

เอนไซม์ที่ใช้

เอนไซม์ DNase 1 และ DNA polymerase

ใช้เอนไซม์ทรานสเฟอร์แฟคเตอร์
ความสำคัญ	การแปลนิคช่วยในการทำเครื่องหมายลำดับดีเอ็นเอเฉพาะ
ส่วนขยายรองพื้นช่วยให้สามารถตรวจจับขนาดลำดับ mRNA เฉพาะและจำนวนที่มีอยู่ในตัวอย่างได้
บทคัดย่อ - Nick Translation และ Primer Extension	Nick translation เป็นวิธีที่ใช้ในการสังเคราะห์ probes ที่ติดฉลากตามกิจกรรมของเอนไซม์ DNA polymerase 1 ของ DNase 1 และ
E coli DNA 9 เป็นวิธีการ
ในหลอดทดลอง	ที่ใช้ในห้องปฏิบัติการก่อนที่จะมีเทคนิคการผสมข้ามพันธุ์ที่แตกต่างกัน ในระหว่างการแปลชื่อ, กิจกรรมของ exonuclease 5'-3 'ของดีเอ็นเอ polymerase 1 จะเอา nucleotides ก่อนกิจกรรม nick และ polymerase ของ DNA polymerase 1 จะแทนที่ nucleotides ที่ถูกลบออกด้วย nucleotides ที่ติดฉลากไว้หลัง nick Primer extension เป็นวิธีการที่ใช้ในการตรวจสอบการถอดรหัส RNA เฉพาะจากส่วนผสมและหาขนาดและปริมาณของ RNA ที่น่าสนใจ นี่คือความแตกต่างระหว่างการแปลชื่อเล่นและการใช้ไพรเมอร์

อ้างอิง

1 เรดอเล็กซ์ "การแปลนิก "สปริงเกอร์ N. p., n d เว็บ. 18 เม.ย. 2017 2. "ส่วนขยายรองพื้น "การวินิจฉัยแห่งชาติ N. p., n d เว็บ. 19 เม.ย. 2017 3. Kuo, M. T. และ W. Plunkett"การแปลโครโมโซม metaphase แบบนิค: การติดฉลากในหลอดทดลองของบริเวณที่มีความรู้สึกไวต่อเชื้อนิวเคลียสในหลอดทดลองในโครโมโซม "การดำเนินการของสถาบันวิทยาศาสตร์แห่งชาติของสหรัฐอเมริกา U. S. หอสมุดแห่งชาติแพทยศาสตร์, กุมภาพันธ์ 1985. Web 19 เม.ย. 2017 4. Raymond et al. "การทดสอบ PCR แบบง่ายสำหรับการตรวจสอบโดยตรงของ microRNAs และ RNA รบกวนสั้น ๆ "อาร์เอ็นเอ Copyright 2005 by RNA Society, พ.ย. 2548 เว็บ 19 เม.ย. 2017 รูปภาพมารยphép:

1. "Primer Extension Assay" โดย Jjnmmnjj - งานของตัวเอง (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia