ความแตกต่างระหว่าง RT PCR และ QPCR | RT PCR และ QPCR

ความแตกต่างที่สำคัญ - RT PCR และ QPCR

Polymerase Chain Reaction เป็นเทคนิคที่ใช้ในการขยายพื้นที่เฉพาะของดีเอ็นเอ ในหลอดทดลอง เนื่องจากการประดิษฐ์เทคนิคนี้โดย Kary Mullis ในปีพ. ศ. 2526 นักวิทยาศาสตร์สามารถทำสำเนาดีเอ็นเอจำนวนหนึ่งพันล้านเพื่อการวิจัย ปัจจุบันได้กลายเป็นเทคนิคที่พบบ่อยและเป็นที่ปฏิบัติกันทั่วไปในห้องปฏิบัติการทางคลินิกและห้องปฏิบัติการวิจัยสำหรับการใช้งานที่หลากหลาย เทคนิค PCR แบบต่างๆเช่น RT PCR, PCR ที่ซ้อนกัน PCR multiplex, PCR Q, RT - QPCR เป็นต้น RT PCR และ Q PCR เป็นรูปแบบที่สำคัญสองอย่างของ PCR ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง PCR กับ PCR คือ PCR ที่ ถูกใช้เพื่อตรวจจับการแสดงออกของยีนโดยการสร้าง transcript ของ DNA (DNA) จาก RNA ในขณะที่ใช้ Q PCR เพื่อวัดปริมาณผลิตภัณฑ์ PCR แบบเรียลไทม์โดยใช้สีย้อมเรืองแสง

เนื้อหา

1 ภาพรวมและข้อแตกต่างที่สำคัญ

2. RT PCR คืออะไร

3. QPCR คืออะไร

4. การเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน - RT PCR และ QPCR

5. สรุป

RT PCR คืออะไร?

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลาไรเซชั่นแบบย้อนกลับ (RT PCR) เป็นตัวแปรของ PCR ซึ่งใช้ในการตรวจจับการแสดงออกของอาร์เอ็นเอ เป็นวิธีที่สำคัญมากในการตรวจหาการแสดงออก mRNA ในเนื้อเยื่อ ใช้ RT PCR เมื่อวัสดุเริ่มต้นของตัวอย่างคือ RNA ใน RT PCR แม่แบบ mRNA จะถูกแปลงเป็นดีเอ็นเอเสริมก่อน ขั้นตอนนี้เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาด้วยเอนไซม์ทรานสครีโปรเซสและกระบวนการนี้เรียกว่าการถอดรหัสย้อนกลับ ประการที่สองใช้ PCR แบบดั้งเดิมสำหรับ cDNA สังเคราะห์ใหม่สำหรับการขยาย

RT PCR เป็นเทคนิคที่มีความไวสูงซึ่งต้องใช้ตัวอย่าง RNA จำนวนน้อย RT PCR มักใช้ในการวินิจฉัยและการหาปริมาณของ RNA species โดยเฉพาะอย่างยิ่งไวรัส RNA เช่นไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์และไวรัสตับอักเสบซี

รูปที่ 01: เทคนิค RT PCR

QPCR คืออะไร?

PCR เชิงปริมาณ (QPCR) เป็นตัวแปร PCR ที่ใช้ในการวัดปริมาณผลิตภัณฑ์ PCR นอกจากนี้ยังเรียกอีกอย่างหนึ่งว่าปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์เรียลไทม์เนื่องจากมีการวัดการขยายเวลาจริงโดยใช้เครื่อง PCR แบบเรียลไทม์ เป็นวิธีที่เหมาะสมในการกำหนดจำนวนของลำดับเป้าหมายหรือยีนที่มีอยู่ในตัวอย่าง คุณลักษณะที่น่าสนใจของ QPCR คือการรวมการขยายและการวัดปริมาณที่แท้จริงเข้าไว้ในขั้นตอนเดียว ดังนั้นความสามารถในการอิเลคโตรโฟเรซิสเจลในการตรวจจับสามารถกำจัดได้ด้วยเทคนิค QPCR QPCR ใช้สีย้อมเรืองแสงในการระบุผลิตภัณฑ์ PCR ในระหว่างปฏิกิริยา PCR ซึ่งจะนำไปสู่การคิดเชิงปริมาณโดยตรงเมื่อผลิตภัณฑ์ PCR สะสมสัญญาณเรืองแสงจะถูกสะสมและจะถูกวัดด้วยเครื่องเรียลไทม์ QPCR สามารถใช้ร่วมกับ RT PCR เป็นที่รู้จักกันในชื่อ RT - QPCR หรือ QRT - PCR และถือเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดมีความละเอียดอ่อนและมีปริมาณมากสำหรับการตรวจจับระดับ RNA ในเซลล์หรือเนื้อเยื่อ

SYBR Green และ Taqman เป็นวิธีการสองวิธีในการตรวจจับหรือชมกระบวนการขยายของ PCR แบบเรียลไทม์ วิธีการของ SYBR Green ใช้สีย้อมเรืองแสงที่เรียกว่า SYBR green และตรวจจับการขยายด้วยการผูกสีย้อมเพื่อผลิตดีเอ็นเอแบบคู่ Taqman ดำเนินการโดยใช้เครื่องตรวจจับที่ติดฉลากแบบคู่และตรวจจับการขยายโดยการย่อยสลายของโพรบโดย Taq polymerase และการปลดปล่อย fluorophore ดังแสดงในรูปที่ 02 วิธีการทั้งสองนี้จะติดตามความคืบหน้าของกระบวนการขยายและรายงานปริมาณของเวลาจริงของผลิตภัณฑ์.

PCR แบบเรียลไทม์มีแอปพลิเคชันมากมายเช่นการหาจำนวนการแสดงออกของยีนการวิเคราะห์ RNA แบบ non R RID, SNP genotyping การตรวจสอบรูปแบบจำนวนสำเนาการตรวจหาการกลายพันธุ์ที่หายากการตรวจหาสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรมการตรวจหาเชื้อโรคที่ติดเชื้อ ฯลฯ

รูปที่ 02: เทคนิค PCR เชิงปริมาณ

RT PCR และ QPCR แตกต่างกันอย่างไร?

- diff บทความกลางก่อนตาราง -> RT PCR และ QPCR

RT PCR เป็นเทคนิคที่ใช้ในการตรวจจับการแสดงออกของยีนด้วยการขยาย

QPCR เป็นเทคนิคที่ขยาย DNA และหาปริมาณผลิตภัณฑ์ PCR ในเวลาจริง
การมีส่วนร่วมของเอนไซม์ reverse transcriptase เอนไซม์	การเอนไซม์ reverse transcriptase สำหรับเอนไซม์ RT PCR
เอนไซม์ reverse transcriptase ไม่ได้ใช้สำหรับ QPCR
การใช้โมเลกุลที่ติดฉลากเรืองแสง	สีหรือเรซิ่นที่มีเครื่องหมายเรืองแสงไม่ใช้สำหรับ RT PCR
สีหรือเรดิโอที่มีเครื่องหมายเรืองแสงใช้สำหรับ QPCR
การหาปริมาณของผลิตภัณฑ์ PCR	ถ้าไม่ได้ควบคู่ไปกับ QPCR RT PCR ไม่สามารถหาจำนวนผลิตภัณฑ์ PCR ได้
QPCR วัดเชิงปริมาณผลิตภัณฑ์ PCR
วัสดุเริ่มต้น	วัสดุเริ่มต้นคือ mRNA
วัสดุเริ่มต้นคือดีเอ็นเอ
การสังเคราะห์ DNA cDNA	มีการผลิตดีเอ็นเอเสริมในช่วง RT PCR
DNA ไม่สมบูรณ์จะไม่เกิดขึ้นระหว่าง QPCR
ข้อมูลอย่างย่อ - RT PCR และ QPCR	RT PCR และ QPCR เป็น PCR แบบดั้งเดิมสองรุ่น เทคนิค RT PCR ทำขึ้นสำหรับตัวอย่าง mRNA และจะถูกขับเคลื่อนโดยการถอดรหัสและการผลิต cDNA แบบย้อนกลับ QPCR ใช้ในการหาจำนวนผลิตภัณฑ์ PCR ในช่วงเวลาจริงของ PCR โดยใช้สีย้อมเรืองแสงหรือหัววัดที่ติดฉลาก ใน QPCR จำนวนของผลิตภัณฑ์ PCR จะแสดงด้วยสัญญาณเรืองแสงที่ปล่อยออกมาจากตัวอย่าง RT PCR เป็นที่นิยมใช้เป็นกระบวนการขยายในขณะที่ QPCR มักใช้เป็นกระบวนการเชิงปริมาณ นี่คือความแตกต่างระหว่าง RT PCR และ QPCR

การอ้างอิง:

1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo และ GK Agrawal Real-Time PCR: ปฏิวัติการตรวจจับและการวิเคราะห์นิพจน์ของยีน "ระบบประสาทในปัจจุบันสำนักพิมพ์ Bentham Science, มิถุนายน 2550 Web 03 เม.ย. 2017

2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els De Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh และ Jo Vandesompele การวิเคราะห์การแสดงออกยีนของ RT-qPCR แบบตรงไปตรงมาและมีความละเอียดอ่อนของตัวอย่าง FFPE "ข่าวธรรมชาติ Nature Publishing Group, 22 ก.พ. 2556 เว็บ 03 เม.ย. 2017

3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon และ C. Mathieu "การใช้ Real-Time Reverse Transcriptase PCR สำหรับการหาปริมาณการแสดงออกของยีนไซโตไคน์ "วารสารเทคนิคชีวกลศาสตร์: JBT สมาคมสิ่งอำนวยความสะดวกด้านทรัพยากรชีวภาพแห่งปีพ. ศ. 2546 เว็บ 03 เม.ย. 2017

รูปภาพมารยphép:

1. "Taqman" โดยผู้ใช้: Braindamaged - งานของตัวเองโดยผู้อัปโหลดต้นฉบับ (Public Domain) ผ่านทาง Commons Commons: Wikimedia.

2. "ปฏิกิริยาการถอดรหัสโพลาไรเซชันแบบย้อนกลับ" โดย Jpark623 - งานของตัวเอง (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia